关于α-葡萄糖苷酶酶活问题

2024/4/25 15:56:17  作者:源叶生物


                                                             关于α-葡萄糖苷酶酶活问题

                         

 

        α-葡萄糖苷酶(EC.3.2.1.20)为淀粉水解酶类中的一种,它又被称为α-葡萄糖苷水解酶,被广泛应用于食品和发酵工业、化学工业以及临床检测和疾病治疗等领域.源叶小编结合多年的售后经验整理一份关于α-葡萄糖苷酶酶活验证的说明书以及注意事项,希望能帮到广大的源叶客户。(此说明书在源叶产品S10050 α-葡萄糖苷酶每个包装都会附带,并且附赠一份底物小样)

 

 

 

 

 




一、试剂

 



1、PBS磷酸盐缓冲液200mM ,pH7.0(源叶货号:R27577);

 


2、底物PNPG,对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷3767-28-0(源叶货号:S10137,鉴于我们时常碰到客户因使用错相应底物而导致无法测出酶活,为了减少此类事件的发生,现源叶赠送20mg对应的底物用来进行对比验证)。‍

 

 




二、操作步骤

 



1、20mg PNPG用4ml纯水溶解(需超声震荡10min);

 


2、100U α-葡萄糖苷酶用1ml PBS 溶解为100u/ml(若单次用不完,请分装保存,参阅下方注意事项),取100ul母液加10ml PBS稀释至1u/ml,再取1ml 1u/ml酶液加4mlPBS稀释至0.2u/ml;

 


3、取0.5ml PNPG溶液,加1ml PBS,37℃水浴5min;

 


4、然后加酶液0.5ml,在37℃水浴15min;

 


5、观察结果,0.2u/ml、1u/ml的酶液均有颜色变化(黄色),说明此产品是有酶活,如下图供参考:

 

              

 

 




三、注意事项

 



1、溶解:酶不要用纯水溶解,建议用pH7.0 200mM PBS缓冲盐溶液(源叶货号:R27577);母液浓度一定不要太低,至少100u/ml,浓度越低酶活损失越快,若单次用不完,请分装保存;

 


2、保存:酶溶液的酶活损失比较快,如果订的是100u 包装因为量少没办法多次称量,可以一次全部溶解,如果订的是250u及以上包装,可以多次称量取用,最小取用量3mg;酶粉末冷冻(-20℃)保存,酶溶液冷藏(2-8℃)保存,不能冷冻,因为解冻过程对酶活损失影响比较大;实验过程中酶溶液不要在室外放置过久,配置完即刻放至冷藏冰箱,随取随用。

 


3、底物:市场上PNPG缩写的产品有很多种,对应的酶是不一样的,α-葡萄糖苷酶对应底物是对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷 3767-28-0(源叶货号:S10137 ),底物错误会导致不显色;若用自己的底物,1u/ml的现配酶液不显色,请用源叶赠送的底物进行验证。

  

 

 

 

 

 

 

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