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源叶实验小课堂——WB-转膜

2025/12/18 15:33:01  作者:源叶


   

转膜是通过电场驱动,将凝胶中的蛋白质从凝胶迁移至固相载体上。这一过程确保了蛋白质的稳定性和免疫原性,

使得抗体能够准确识别并检测目标蛋白。常用的固相载体包括 PVDF膜 和 硝酸纤维素膜 (NC膜)。PVDF膜因

其强大的蛋白结合能力和低荧光背景,成为WB实验中最常用的转印膜‌。

 

         

转膜方法主要包括湿转法和半干转法:

湿转法‌:适用于大多数蛋白质,尤其是高分子量蛋白(>100 kDa),转膜时间长(60-90分钟),需在低温环境下进行‌。

半干转法‌:适用于低分子量蛋白(<50 kDa),转膜速度快(15-30分钟),但对缓冲液和电流要求严格,容易发热,需控制温度‌。

 

 

转膜后无信号‌:可能原因包括电流/时间不足、膜未激活、方向装反。对策是检查转膜装置方向,确保PVDF膜充分激活‌。

背景高或非特异性条带‌:可能原因包括膜未封闭完全、抗体浓度过高。对策是延长封闭时间(推荐5%脱脂奶粉封闭1小时),优化抗体稀释比例‌。

高分子量蛋白转膜困难‌:对策是改用0.45 μm厚的PVDF膜,延长转膜时间至2小时以上‌。

 

 

 

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