动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺测定的前处理方法

2021/8/5 9:49:53  作者:小曾


环丙氨嗪的危害及检测目的

环丙氨嗪,又名“灭蝇胺”,养殖场通常称为“蝇蛆净”,属于1, 3, 5-三嗪类昆虫生长调节剂。环丙氨嗪也是一种高效的昆虫生长抑制剂, 常作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业动物饲料中,以原药以及代谢产物的形式随粪便排出体外,并沉积在粪便中以杀灭粪便中的蝇蛆,从而控制畜禽舍以及周围环境中的有害昆虫,达到净化环境的目的,且能提高动物生长性能。在动物养殖生产过程中,许多养殖户为了减少养殖场的蚊蝇,把环丙氨嗪长期应用于动物饲料中,导致畜禽肌肉组织中药物残留超标,严重威胁着消费者身体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中明确规定了环丙氨嗪在动物靶组织中的残留限量,并且规定泌乳期禁用。

本文阐述了如何将环丙氨嗪和三聚氰胺从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据国标GB 29704-2013,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目:环丙氨嗪、三聚氰胺

应用范围:鸡的肌肉、肾脏和蛋

超高效液相色谱-串联质谱法

方法原理:试料中残留的环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺,用3 %三氯乙酸溶液提取,MCX柱净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。

前处理仪器:

分析天平(感量0.00001 g和0.01 g);涡旋混合器;离心机;氮吹仪;离心管(50 mL),微孔滤头(0.2 μm);固相萃取装置。

检测仪器:UHPLC-MS/MS+ESI源
样品的制备与保存

1. 鸡蛋

取新鲜或冷冻空白或供试鸡蛋,去壳,并使均质。

取均质后的供试样品,作为供试试料;

取均质后的空白样品,作为空白试料;

取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。

2. 鸡的肌肉和肾脏组织

取新鲜或冷冻空白或供试组织,绞碎,并使均质。

取均质后的供试样品,作为供试试料;

取均质后的空白样品,作为空白试料;

取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。

所有试料在零下20 ℃ 以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试料2 g±0.02 g,于50 mL离心管中,加3 %三氯乙酸溶液20 mL,涡旋混合30 s,超声10 min,静置10 min,10000 r/min离心10 min,取上层液,备用。

2.净化

MCX柱(60 mg,3 mL)依次用甲醇3 mL和水3 mL活化,取备用液10 mL过柱,加2 %甲酸水溶液3 mL、甲醇3 mL淋洗,抽干,加5 %氨化甲醇溶液3 mL洗脱,抽干,收集洗脱液,于50 ℃ 氮气吹干,用50 %乙腈水溶液1.0 mL溶解残余物,滤膜过滤,供液质测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用50 %乙腈水溶液配成1 mg/mL标准储备液,在2 ℃~8 ℃避光保存,可使用3个月。
2.本方法使用三氯乙酸溶液提取目标化合物,阳离子交换柱进行富集净化,稀释倍数=2,相当于1 g试料进行上机检测。
3.固相萃取过程中需要控制流速,使溶液一滴一滴地流下,以保证离子交换的效果。
4.氨水甲醇溶液现用现配,避免氨水挥发,影响洗脱效果;洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入,可以增加洗脱率。
5.由于环丙氨嗪和三聚氰胺极性比较强,建议选用长的(150 mm)亲水型色谱柱,保证色谱峰的保留效果。
6.本方法使用基质曲线进行定量,还可以使用环丙氨嗪和三聚氰胺相对应的同位素内标配制标准曲线。

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