动物源性食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理方法

2021/8/5 9:46:34  作者:小曾


甲苄喹啉和癸氧喹酯的危害及检测目的

甲苄喹啉和癸氧喹酯同属于喹啉类抗球虫药物,用于预防及治疗球虫病。这类抗球虫药具有毒性低、耐受性好、代谢快的优点,应用非常广泛。甲苄喹啉的抗球虫效力较强,是癸氧喹酯的两倍。癸氧喹酯是全球唯一被日本、欧盟、美国和中国政府批准使用的化学型抗球虫药,与目前中国允许使用的兽药饲料添加剂无任何配伍禁忌。尽管这类抗球虫药物的毒性较低,但抗球虫药物的使用易导致球虫出现抗药性,并且畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源性食品的安全,我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中明确规定了癸氧喹酯在鸡靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将甲苄喹啉和癸氧喹酯从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据行标SN/T 2444-2010,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目:甲苄喹啉、癸氧喹酯

应用范围:鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶
液相色谱-质谱/质谱法
方法原理:采用乙腈提取试样中残留的甲苄喹啉和癸氧喹酯,提取液经固相萃取柱净化,液相色谱-质谱/质谱检测和确证,外标法定量。

前处理仪器:

固相萃取装置;氮吹浓缩仪;均质器;旋涡混匀器;离心机(5000 r/min以上);分析天平(感量0.1 mg和0.01 g);移液器(10 μL~100 μL和100 μL~1000 μL);聚丙烯离心管(50 mL和15 mL,带螺旋盖);容量瓶(100 mL和1000 mL);往复式振荡器。

检测仪器:LC-MS/MS+ESI源
样品的制备与保存
1. 鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋和牛肝
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g,充分捣碎均匀,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封,并标明标记,于零下18 ℃ 以下冷冻存放。
2. 牛奶
从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封,并标明标记,于4 ℃ 冷藏存放。
制样要求:在制样的操作过程中,应防止样品污染。
前处理方法
1.提取
称取样品5 g(精确至0.01 g)于50 mL具塞离心管中,加入15 mL乙腈,旋涡混匀1 min,在往复式振荡器上振荡提取5 min,3000 r/min离心5 min,将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈,重复提取一次,5000 r/min离心5 min,合并乙腈层。在乙腈提取液中加入过量氯化钠,旋涡混匀1 min,5000 r/min离心3 min。取上层乙腈层5 mL于15 mL离心管中,45 ℃水浴下吹氮浓缩至3 mL,加水定容至10 mL,待净化。
2.净化
将待净化液转入HLB固相萃取柱(60 mg,3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化),以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱,弃去流出液。再分别用3 mL 30 %乙腈水溶液,3 mL水淋洗,弃去流出液,用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中,45 ℃水浴下吹氮浓缩至近干,用样品定容溶液(乙腈+水1+1加0.1 %甲酸)溶解并定容至1.0 mL,旋涡混匀后过0.2 μm滤膜,用液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.甲苄喹啉标准物质用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的标准储备液,在零下18 ℃以下避光保存;癸氧喹酯标准物质用三氯甲烷配成100 mg/L的标准储备液,在零下18 ℃以下避光保存。
2.本方法使用乙腈分两次提取目标化合物,加盐净化后,再使用HLB柱进行富集净化,相当于1 g试料进行上机检测。
3.使用乙腈作为提取溶剂时,需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好,但是容易使肌肉样品“抱团”不分散,影响目标物的提取率。所以在加入乙腈后应立即进行涡旋处理,使肉样分散。
4.固相萃取过程中需要控制流速,使溶液一滴一滴地流下,以保证吸附解离的效果。
5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水,防止水进入洗脱液中,导致后续浓缩过程中洗脱液不能被吹干。
6.本方法使用基质加标流程曲线进行定量,还可以使用癸氧喹酯相对应的同位素内标配制标准曲线。

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