SS培养基有效保存期内的质量控制

2021/4/7 12:20:10  作者:中华试剂网


   为了给临床微生物检验提供方便,提高工作效率和检测质量,我们对制备的沙门-志贺菌培养基(简称SS培养基)进行保存期实验研究 ,现将结果报告如下。 

 

材料与方法

1 材料 购入的SS干燥培养基,按分值计算法检定培养基质量;判定标准,见表1

1  SS培养基合格分值

项目

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

菌落直径分值

10.000

10.000

10.000

菌落差分值

2.595

-1.825

0.355

生长率分值

5.000

5.000

5.000

小计分值

27.595

13.175

15.355

总分值

 

56.125

 

 

 

2 方法 按使用说明称取SS干燥培养基,置于三角烧瓶中,加入蒸馏水,加热煮沸至泡沫消失,冷却至5060,在生物安全柜内倾注入已灭菌的一次性使用塑料平皿中,用包装袋密封包装,置于普通冰箱内,备用。将指示菌菌种管打开,分别接种于营养肉汤中,于 37培养1824 h 。取一接种环营养肉汤菌悬液,接种在营养琼脂上,37培养l 82 4 h 。挑取单个菌落,置于营养肉汤中,制成悬液,然后作l0-6稀释,取10稀释度菌悬液置于被检定培养基平板和对照1号培养基上,用L棒涂布在整个培养基表面 (使菌落控制在50100cfu/皿范围内) 。置于37培养24h 。计数菌落数,测量每个菌落直径(精确至0.02mm) ,计算平均菌落直径。 

 

 

1 菌落直径和生长率 新配制的SS培养基,分别接种3株指示菌,分别测量菌落直径和生长率。在新配制的培养基上;大肠埃希菌平均菌落直径为1.0 4 m m,生长率为11.7%;痢疾志贺菌平均菌落直径为2.06 m m,生长率为70.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径为2.35mm,生长率为101.2%。当在 4冰箱内密封保存10 W后;大肠埃希菌平均菌直径增大为1.81m m,生长率上升为51.4 %;痢疾志贺菌平均菌落直径缩小为1.33mm,生长率下降为56.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径缩小为1.77 mm,生长率下降为 88.5 %。见表 2   2 指示菌在 S S培养基上菌落直径和生长率

 

观察时间

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

菌落直径(mm

生长率(%

菌落直径(mm

生长率(%

菌落直径(mm

生长率(%

1

1.04

11.7

2.06

70.2

2.35

101.2

1

1.20

11.6

2.10

68.9

2.25

100.3

2

1.22

12.5

2.08

68.8

2.26

99.9

3

1.25

13.2

1.98

68.3

2.18

99.6

4

1.28

13.9

1.88

67.8

2.20

98.4

5

1.37

13.9

1.76

66.2

2.13

98.5

6

1.38

14.3

1.78

66.4

2.10

97.9

7

1.44

34.7

1.62

65.5

2.02

97.3

8

1.42

36.2

1.64

62.1

1.94

96.5

9

1.59

47.9

1.50

58.5

1.88

90.1

10

1.81

51.4

1.33

56.2

1.77

88.5

 

 

2 菌落直径分值和生长率  新配制的SS培养基采用分值计算法鉴定培养基,质量总分值为 100.87,其中大肠埃希菌小计分值为39.45;痢疾志贺菌小计分值为 33.76;鼠伤寒沙门菌小计分值为27.66。在4冰箱内存放至第6周,总分值为63.89,放至第7周,总分值降至4 9.34 < 56.125 ,见表 3  

3 指示菌在 SS培养基上菌落直径分值和生长率分值

观察时间

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

总分值

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

1

19.25

5.87

39.45

20.39

5.58

33.76

16.31

5.03

27.66

100.87

1

11.11

5.90

30.51

21.14

5.44

27.75

13.91

4.77

19.85

78.11

2

15.18

5.29

33.9

20.76

5.43

27.26

14.15

4.65

20.02

81.18

3

14.50

5.38

33.16

18.90

5.37

24.84

12.23

4.56

17.61

75.61

4

13.82

5.19

32.14

17.04

5.32

22.42

12.71

4.21

17.94

72.40

5

11.79

5.16

29.62

14.80

5.16

19.43

8.63

4.24

13.44

62.49

6

11.56

5.03

29.22

15.18

5.14

19.88

10.31

4.06

14.79

63.89

7

10.20

-1.51

21.02

12.20

5.06

16.02

8.39

3.89

12.30

49.34

8

10.66

-1.99

21.09

12.57

4.68

16.12

6.48

3.65

9.85

47.05

9

6.81

-5.75

12.64

9.96

4.28

12.41

5.04

1.77

6.13

31.18

10

1.83

-6.87

5.44

6.30

4.03

8.14

2.40

1.31

2.47

16.06

 

 

 

本次实验的 3株指示菌在 4 冰箱内存放不同时间的培养基的菌落直径和生长率结果表明,随着存放时间的延长,菌落直径缩小和生长率下降,但很难判定培养基的质量优劣。

本次实验选用质量合格的SS培养基 (总分值100.87>56.125 ,其中大肠埃希菌分值为39.45>27.595,痢疾志贺菌分值33.76>13.175,鼠伤寒沙门菌分值27.66>15.355 ) ,配制一批平板,密封存放在4冰箱内,每隔一周用 3株指示菌鉴定,采用分值计算法计算质量分值,实验结果表明:在 4条件下密封存放 6 W,质量仍达到合格分值 (63.89>56.125)要求 ,但 鼠伤寒沙门菌的分值自第5周起,质量分值己小于合格分值(13.44<15.335 ) 。存放第 7周时 ,质量总分值已降至49.34 ,属不合格质量分值,从3株指示菌的质量分值显示 ,大肠埃希菌和鼠伤寒沙门菌的分值均未达到质量合格分值,而痢疾志贺菌的质量分值仍为合格。从菌落直径分值和生长率分值的结果表明,当指示菌的质量分值不合格时,首先出现不合格是生长率分值。实验结果表明制备好的SS培养基在 4冰箱内存放 6 W,对肠道致病菌的分离鉴定无不良影响。 

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