为了给临床微生物检验提供方便,提高工作效率和检测质量,我们对制备的沙门-志贺菌培养基(简称SS培养基)进行保存期实验研究 ,现将结果报告如下。
材料与方法
1 材料 购入的SS干燥培养基,按分值计算法检定培养基质量;判定标准,见表1。
表 1 SS培养基合格分值
项目
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大肠埃希菌
|
痢疾志贺菌
|
鼠伤寒沙门菌
|
菌落直径分值
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≥10.000
|
≥10.000
|
≥10.000
|
菌落差分值
|
≥2.595
|
≥-1.825
|
≥0.355
|
生长率分值
|
≥5.000
|
≥5.000
|
≥5.000
|
小计分值
|
≥27.595
|
≥13.175
|
≥15.355
|
总分值
|
≥56.125
|
2 方法 按使用说明称取SS干燥培养基,置于三角烧瓶中,加入蒸馏水,加热煮沸至泡沫消失,冷却至50℃~60℃,在生物安全柜内倾注入已灭菌的一次性使用塑料平皿中,用包装袋密封包装,置于普通冰箱内,备用。将指示菌菌种管打开,分别接种于营养肉汤中,于 37℃培养18—24 h 。取一接种环营养肉汤菌悬液,接种在营养琼脂上,37℃培养l 8~2 4 h 。挑取单个菌落,置于营养肉汤中,制成悬液,然后作l0-6稀释,取10稀释度菌悬液置于被检定培养基平板和对照1号培养基上,用L棒涂布在整个培养基表面 (使菌落控制在50—100cfu/皿范围内) 。置于37℃培养24h 。计数菌落数,测量每个菌落直径(精确至0.02mm) ,计算平均菌落直径。
结 果
1 菌落直径和生长率 新配制的SS培养基,分别接种3株指示菌,分别测量菌落直径和生长率。在新配制的培养基上;大肠埃希菌平均菌落直径为1.0 4 m m,生长率为11.7%;痢疾志贺菌平均菌落直径为2.06 m m,生长率为70.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径为2.35mm,生长率为101.2%。当在 4℃冰箱内密封保存10 W后;大肠埃希菌平均菌直径增大为1.81m m,生长率上升为51.4 %;痢疾志贺菌平均菌落直径缩小为1.33mm,生长率下降为56.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径缩小为1.77 mm,生长率下降为 88.5 %。见表 2 。 表 2 指示菌在 S S培养基上菌落直径和生长率
观察时间
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大肠埃希菌
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痢疾志贺菌
|
鼠伤寒沙门菌
|
菌落直径(mm)
|
生长率(%)
|
菌落直径(mm)
|
生长率(%)
|
菌落直径(mm)
|
生长率(%)
|
第1天
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1.04
|
11.7
|
2.06
|
70.2
|
2.35
|
101.2
|
第1周
|
1.20
|
11.6
|
2.10
|
68.9
|
2.25
|
100.3
|
第2周
|
1.22
|
12.5
|
2.08
|
68.8
|
2.26
|
99.9
|
第3周
|
1.25
|
13.2
|
1.98
|
68.3
|
2.18
|
99.6
|
第4周
|
1.28
|
13.9
|
1.88
|
67.8
|
2.20
|
98.4
|
第5周
|
1.37
|
13.9
|
1.76
|
66.2
|
2.13
|
98.5
|
第6周
|
1.38
|
14.3
|
1.78
|
66.4
|
2.10
|
97.9
|
第7周
|
1.44
|
34.7
|
1.62
|
65.5
|
2.02
|
97.3
|
第8周
|
1.42
|
36.2
|
1.64
|
62.1
|
1.94
|
96.5
|
第9周
|
1.59
|
47.9
|
1.50
|
58.5
|
1.88
|
90.1
|
第10周
|
1.81
|
51.4
|
1.33
|
56.2
|
1.77
|
88.5
|
2 菌落直径分值和生长率 新配制的SS培养基采用分值计算法鉴定培养基,质量总分值为 100.87,其中大肠埃希菌小计分值为39.45;痢疾志贺菌小计分值为 33.76;鼠伤寒沙门菌小计分值为27.66。在4℃冰箱内存放至第6周,总分值为63.89,放至第7周,总分值降至4 9.34 < 56.125 ,见表 3 。
表 3 指示菌在 SS培养基上菌落直径分值和生长率分值
观察时间
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大肠埃希菌
|
痢疾志贺菌
|
鼠伤寒沙门菌
|
总分值
|
菌落直径分值
|
生长率分值
|
分值小计
|
菌落直径分值
|
生长率分值
|
分值小计
|
菌落直径分值
|
生长率分值
|
分值小计
|
第1天
|
19.25
|
5.87
|
39.45
|
20.39
|
5.58
|
33.76
|
16.31
|
5.03
|
27.66
|
100.87
|
第1周
|
11.11
|
5.90
|
30.51
|
21.14
|
5.44
|
27.75
|
13.91
|
4.77
|
19.85
|
78.11
|
第2周
|
15.18
|
5.29
|
33.9
|
20.76
|
5.43
|
27.26
|
14.15
|
4.65
|
20.02
|
81.18
|
第3周
|
14.50
|
5.38
|
33.16
|
18.90
|
5.37
|
24.84
|
12.23
|
4.56
|
17.61
|
75.61
|
第4周
|
13.82
|
5.19
|
32.14
|
17.04
|
5.32
|
22.42
|
12.71
|
4.21
|
17.94
|
72.40
|
第5周
|
11.79
|
5.16
|
29.62
|
14.80
|
5.16
|
19.43
|
8.63
|
4.24
|
13.44
|
62.49
|
第6周
|
11.56
|
5.03
|
29.22
|
15.18
|
5.14
|
19.88
|
10.31
|
4.06
|
14.79
|
63.89
|
第7周
|
10.20
|
-1.51
|
21.02
|
12.20
|
5.06
|
16.02
|
8.39
|
3.89
|
12.30
|
49.34
|
第8周
|
10.66
|
-1.99
|
21.09
|
12.57
|
4.68
|
16.12
|
6.48
|
3.65
|
9.85
|
47.05
|
第9周
|
6.81
|
-5.75
|
12.64
|
9.96
|
4.28
|
12.41
|
5.04
|
1.77
|
6.13
|
31.18
|
第10周
|
1.83
|
-6.87
|
5.44
|
6.30
|
4.03
|
8.14
|
2.40
|
1.31
|
2.47
|
16.06
|
讨 论 本次实验的 3株指示菌在 4 ℃冰箱内存放不同时间的培养基的菌落直径和生长率结果表明,随着存放时间的延长,菌落直径缩小和生长率下降,但很难判定培养基的质量优劣。
本次实验选用质量合格的SS培养基 (总分值100.87>56.125 ,其中大肠埃希菌分值为39.45>27.595,痢疾志贺菌分值33.76>13.175,鼠伤寒沙门菌分值27.66>15.355 ) ,配制一批平板,密封存放在4℃冰箱内,每隔一周用 3株指示菌鉴定,采用分值计算法计算质量分值,实验结果表明:在 4℃条件下密封存放 6 W,质量仍达到合格分值 (63.89>56.125)要求 ,但 鼠伤寒沙门菌的分值自第5周起,质量分值己小于合格分值(13.44<15.335 ) 。存放第 7周时 ,质量总分值已降至49.34 ,属不合格质量分值,从3株指示菌的质量分值显示 ,大肠埃希菌和鼠伤寒沙门菌的分值均未达到质量合格分值,而痢疾志贺菌的质量分值仍为合格。从菌落直径分值和生长率分值的结果表明,当指示菌的质量分值不合格时,首先出现不合格是生长率分值。实验结果表明制备好的SS培养基在 4℃冰箱内存放 6 W,对肠道致病菌的分离鉴定无不良影响。