TRIS缓冲液怎么配制?

2021/3/25 15:15:12  作者:上海腾准生物


 TRIS作为常用生物缓冲液的一种,常用于生物化学实验中的TAE和TBE缓冲液(用于核酸的溶解),其氨基可以与醛发生缩合反应。Tris为弱碱,Tris碱的水溶液pH在10.5左右,一般加入盐酸以调节pH值至所需值,即可获得该pH值的缓冲液,其缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间,但应注意温度对于Tris的pKa的影响,在室温25℃下,pKa为8.1。

 
Tris缓冲液配置方法:
 
Tris-HCl,Tris-EDTA的配制:
 
一、1M Tris-HCl (pH 7.4,7.6,8.0) 配制1000ml
 
配制方法:
 
1.称量121.1g Tris置于1000ml烧杯中。
 
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
 
3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
 
 
4.将溶液定容至1000ml。
 
5.高温高压灭菌后,室温保存。
 
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
 
二、1.5M Tris-HCl (pH 8.8)配制1000ml
 
配制方法:
 
1.称量181.7g Tris置于1000ml烧杯中。
 
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
 
3.用浓HCl调节pH值至8.8。
 
4.将溶液定容至1000ml。
 
5.高温高压灭菌后,室温保存。
 
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
 
三、TE即Tris-EDTA buffer(10mM Tris,1mM EDTA,pH7.4 pH7.6 pH8.0)。
 
10×TE Buffer (pH 7.4,7.6,8.0) 100mM Tris-HCl,10 mM EDTA 配制1000ml
 
配制方法:
 
1. 量取下列溶液,置于1000ml烧杯中。
 
①1M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100ml;
 
②500mM EDTA(pH8.0) 20ml
 
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。
 
3.将溶液定容至1000ml后,高温高压灭菌。
 
4.室温保存。
 
注意事项:
 
1、缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;
 
2、 温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,△pKa/℃=-0.031,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃;
 
3、 易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;
 
4、 此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
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