吖啶酯的发光原理

2021/3/25 14:56:29  作者:上海腾准生物


 化学发光免疫分析法是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。应用于临床检验的化学发光体系有多种,最主要的有鲁米诺及其衍生物、吖啶酯、螺旋金刚烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物和电化学发光体系等。


吖啶酯的发光原理:在碱性H2O2溶液中,吖啶酯的分子受到过氧化氢离子进攻时,吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9和H2O2(过氧化氢)形成不稳定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮。吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光,不需要催化剂,发光系统简单。同时这类化合物的发光为闪光型,加入发光启动试剂后0.4s左右发射光强度即达到最大,半衰期为0.9s左右,非常省时。基于上述特点,为增强吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物的化学发光强度,有些在发光启动试剂中加入Triton X-100、CTAC、Tween-20(吐温-20)等表面活性剂。


吖啶酯

相比鲁米诺发光体系,吖啶酯类具有如下的优点:

1.吖啶酯发光系统简单,不需要催化剂。

在碱性条件下,吖啶酯分子受到过氧化氢攻击可生成二氧乙烷,二氧乙烷不稳定而分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮,当其回到基态时发出波长为430nm的光,不需要催化剂,发光系统简单。

2.吖啶酯发光效率高且强度大。

吖啶酯化学发光为闪光型,在化学发光免疫分析领域与其它技术相比具有优势,吖啶酯化学发光在加入启动剂0.4s后发射光强度达到最大,半衰期为0.9s,2s内发光基本结束,可以实现快速检测,吖啶酯具有较高的量子产率,其化学发光效率较高,通常是鲁米诺的五倍或五倍以上。

3.吖啶酯发光体系的干扰因素少,本底极低,信噪比很高。

吖啶酯类化合物从发光的机理来说的特点是发光反应中在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来,即未发光部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。此外,吖啶酯分子量小,易与蛋白质通过化学键牢固联结(即为标记),对联结后的抗体构象影响小(进而保证了其在后续免疫检测中保持良好的反应性),且联结物的稳定性好。

在各个领域应用方面,吖啶酯发光免疫分析技术有着极大的帮助,根据双抗体夹心法实验原理,利用吖啶酯化学发光免疫分析技术一结合生物素一亲和素磁颗粒分离技术,建立一种定量测定血清中癌胚抗原含量的检测方法。由于应用了吖啶酯化学发光法,测定血清中癌胚抗原的含量变得更加快速简便,使得患者能够更及时的得到治疗,让医学技术有了更大进步。由于吖啶酯化学发光免疫技术是一种非常精确的定量检测,使检测确率更高更快速方便,而一般免疫学检测的准确率明显低于吖啶酯发光免疫技术的结果,且时间长,不方便。

总结以上,吖啶酯化学发光分析技术可以普遍推广和进行更深入的研究。
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