多肽样品在上制备柱前为什么需要进行前处理？有哪些前处理的方法？
答：制备使用的色谱柱子因处理的样品多，比用于分析色谱柱更容易受污染，对需要过柱样品进行一些前处理可以有效延长制备柱的使用寿命。
样品的前处理主要方法有：萃取、过滤、离心、上预柱。
色谱柱
2. 为什么流动相中要加入三氟乙酸作为离子对试剂？还有哪些流动相体系或离子对试剂可用于多肽的分离纯化？
答：昂拓莱司目前常用的流动相体系是水加乙腈，以三氟乙酸(TFA)为离子对试剂。根据不同多肽选择合适的梯度洗脱分离多肽。
加入TFA能调节洗脱液的PH，同时作为离子对试剂与多肽会相互作用，能增强分离效果，明显改善样品峰形。
还可用于多肽分离纯化的流动相体系或离子对试剂有：醋酸体系，磷酸体系，盐酸体系，七氟丁酸等。通过调节PH同样可以取得很好的分离效果。
3.如何选择纯化过程中使用的色谱柱填料？
答：不同的序列其多肽理化性质及疏水性有很大的不同。多数情况分子量<4000和亲水性多肽用C18柱分离效果zui佳。
分子量 >5000和ji端疏水性的多肽以C4柱分离效果zui佳。
C8色谱柱介于C18和C4之间，他的应用效果偏向于C18；对一些特别选择性的多肽，也可选择苯基柱和聚合物色谱柱。
4. 在纯化过程中选择聚合物填料的原则是什么？
答：需要使用温度条件进行或高于正常pH纯化时；可以使用pH范围很宽的聚合物色谱柱。其优点是在ji端pH条件下不会降解，可以使用强酸与强碱作为流动相进行分离纯化。
5. 影响多肽纯度检测结果的因素
答：多肽纯度检测结果的影响因素很多，包括：流动相体系、色谱柱型号、柱温、波长及色谱仪的性能指标，每一项不同都可能造成结果产生误差。
6. 反相色谱分离纯化后，怎样去除产品中流动相产品中的TFA，乙腈等杂质？
答：冻干的办法应该可以除去大多数TFA和乙腈，只要不chao过允许范围，这种办法是简单、有效的。对TFA含量要求更高的一些药物肽冻干的方法一般无法完全达到要求，需要进行专门的转盐或脱盐。
7. 多肽一般有哪几种盐的形式？通过什么方式转盐或脱盐？
答：多数多肽都是在TFA体系下分离纯化的，所以多肽以TFA盐的形式zui多，其次药物肽一般有醋酸盐及盐酸盐的形式，少数yao物肽会有一些特别的盐形式。转盐方式多为离子交换法和HPLC法，而脱盐可用透析袋和chao滤膜。
8. TFA在缓冲液中是不是只起到调节PH的作用？TFA的浓度越高基线漂移越厉害，那是不是说TFA的浓度在缓冲液PH允许的情况下越低越好？
答：(1)TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05-0.1%，过高的浓度，会使溶液偏酸，长时间使用可能影响柱子寿命。
(2)同时TFA抑制硅胶表面硅醇基，可以改善碱性样品的峰型。有时0.1%TFA分离不理想。可以考虑把浓度加大到0.2%。但是要注意用完后及时冲洗色谱柱。