用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1：1的），PH计测定ph值，调节ph=4.2-4.5，即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。
对鼠注射时，需要用柠檬酸缓冲液以1%的浓度溶解，按空腹体重注射相应的链脲佐菌素，在30分钟内注射完毕。链脲佐菌素容易失活，链脲佐菌素快速称取后仍要求干燥避光，推荐用干燥铝箔（或锡箔）纸。
鼠禁食12小时以上（一般过夜禁食，不禁水）。禁食的时间越长，链脲佐菌素对胰岛β细胞的破坏力越明显，即药效越高。所以相对禁食时间延长，可以降低链脲佐菌素的用量。尾部注射即静脉注射，药物利用率较高，同比腹腔注射，可以节省药量，缺点是操作起来不如腹腔注射方便。
过夜禁食后称重，按大鼠总重量比称取链脲佐菌素，放一干燥灭菌瓶内，外用锡纸包好，将柠檬酸缓冲液及装链脲佐菌素的瓶子置冰浴，一起带到动物房，如果注射操作技术不熟练，应两组交替注射，建议分组溶解链脲佐菌素，比如10只或15只鼠/组。推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相对的危险性较低，但也不容易成模，常规操作中多要求快速注射。当然，链脲佐菌素的剂量是决定血糖高低的主要因素。