中性粒细胞分离的方法

2021/2/23 14:53:20  作者:郭敏


 标准方法:Ficoll-泛影钠(Ficoll-Hypaque)密度梯度及红细胞裂解法。

1.取一50ml聚乙烯管,无菌采集人外周静脉血,加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min,离心,室温。
2.吸出富含血小板的上清,2500gX15min,制备无血小板血浆(platelet-poor Plasma, PPP)。
3.余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000,用无菌生理盐水配制),并用生理盐水(0.9%)调节最终体积至50ml,轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。
4.吸出富含白细胞的上层液,275gX6min。
5.沉淀的细胞用8mlPPP-生理盐水(1:4)重悬,并移到15ml离心管中。
6.悬液细胞上面加入3mlFicoll-Hypaque(密度1.077),750gX5min,室温。
7.吸取富含中性粒细胞和红细胞层,用0.155M NH4Cl重悬细胞,使红细胞裂解,然后中性粒细胞用含0.25%BSA Hanks平衡液(HBSA,无钙)洗2次,最终用HBSA(含钙)重悬。
8.用此法可得95%以上的中性粒细胞。
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