嗜盐性试验是弧菌科等细菌鉴定的一项重要鉴别试验，在实际应用中．尤其是市售嗜盐微量生化反应管的使用．常常遇到难以判断的结果即细菌真正繁殖的混浊与因接种菌量过量 的浑浊之区别，根据细菌在繁殖过程中能将 2、3、5-氯化三苯四氮唑 (TTC)还原成红色的甲臢的原理，我们将TTC加于嗜盐培养基中作为指示剂观察培养基的颜色变化同时对TTC的浓度、培养基高压灭菌保存条件作了一些实验研究现。将结果报告如下。
材料与方法
1 培养基 嗜盐性培养基配制按文献进行，根据实验设计选择含NaCl为0％、3％、6％及10％ 4种浓度。配制（0％NaCl）的TTC溶液．按不同量加于上述4种浓度的嗜盐培养 基中，使TTC终浓度分别为0.10／万、0.25／万、0.50／万、1.00／万、2.00万、3.00／万和 4.00／万。即成TTC嗜盐培养基,分装小口径试管，灭菌后备用
2 实验菌株 本参加WHO质控鉴定菌株及本站分离保存菌株。
3 实验方法 将实验各菌种分别接种于含不同浓度TTC嗜盐培养基，37℃培养18—24h．观察结果。
4 培养基高压灭菌 将含TTC的培养基分别置15 p 15 min、12 p 15min、10 p 12 min三种条件下蒸汽高压灭菌，观察灭菌后颜色变化。
5 培养基保存条件的实验 将灭菌后培养基置冰箱室内避光，室内不避光三种环境中，观察保存变化。
结果与讨论
1 弧菌科各菌属 24株菌和9株化脓性球菌经不同浓度TTC嗜盐培养基培养18h后的结果，见表1 表 2 。
表 1 弧菌科细菌在不同含量TTC培养基培养18小时的显色情况表
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NaCl浓度（%）
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TTC浓度（/万）
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菌名
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霍乱弧菌
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副溶血性弧菌
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类志贺邻单胞菌
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气单胞菌
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创伤弧菌
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拟态弧菌
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溶藻弧菌
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0
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0.10
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+
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-
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-
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+
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-
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+
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-
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0.25
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+ + +
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-
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-
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+ +
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-
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+ + +
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-
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0.50
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+ + +
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-
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-
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+ +
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-
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+ + +
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-
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1.00
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+ + +
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-
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-
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+ +
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-
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+ + +
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-
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3
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0.10
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+
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+ +
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+ +
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+
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+ +
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+ +
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- +
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0.25
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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0.50
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+ + +
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+ + + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + + +
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+ + +
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1.00
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+ + + +
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+ + + +
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+ + +
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+ + +
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+ + +
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+ + + +
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+ + +
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6
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0.10
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-
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+ +
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-
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-
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+ +
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-
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- -
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0.25
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-
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+ + +
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-
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-
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+ + +
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-
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+ + +
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0.50
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-
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+ + + +
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-
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-
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+ + +
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-
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+ + +
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1.00
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-
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+ + + +
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-
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-
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+ + +
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-
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+ + +
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10
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0.10
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-
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-
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-
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-
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-
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+ +
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0.25
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-
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-
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-
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-
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-
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+ + +
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0.50
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-
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-
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-
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-
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-
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+ + +
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1.00
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-
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-
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-
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-
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-
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+ + +
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注：“+”表示显色程度；“-”表示不显色
2 部分化脓性球菌在不同含量 TTC培养基培养 18小时的显色情况
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NaCl（%）
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TTC浓度（/万）
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菌名
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链球菌
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肠球菌
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葡萄球菌
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6.5
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0.10
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-
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-
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0.25
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+
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+
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0.50
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+ +
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+ + +
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1.00
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+ +
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+ + +
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7.5
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0.10
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+
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0.25
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+ +
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0.50
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+ + +
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1.00
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+ + +
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注：“+”表示显色程度；“-”表示不显色
表中显示经18 h培养即出现明显红色， 以往常需培养48h才能肉眼判断生长是否混浊．因此作为指示剂．方便了结果观察且缩短了报告时间
2 TTC浓度选择 ：TTC抑制试验．于上述培养基中分别接种定量(每毫升约含10万个细菌)的弧菌及部分耐盐球菌连续实验5次，结果在0.10～3.00／万 范围内．弧菌科细菌生 长未受抑制：超过2.00／万时．嗜盐球菌生长受抑制，从表1、表2分析显色情况．弧菌科细菌在TTC终浓度0.10／万时显色最弱，呈微红色，其余浓度显色基本一致： 部分化脓性 球菌在终浓度0.10／万、0.25／万时显色最弱。根据抑制试验和显色情况综合分析．我们从 为弧菌以终浓度0.25／万为宜．部分化脓性球菌选择TTC终浓度0.50／万为宜 。
3.TTC嗜盐培养基高压灭菌条件选择：将含TTC培养基分别置15p 15min、12p 15min,10p 12min 3种条件下经电热手提式高压蒸汽灭菌器灭菌，各试验5次。结果经15 15min 后培养基显示肉眼可见的微红色．表示TTC已被部分破坏而另外 2种条件下肉眼觉 察不到红色。因此．我们认为TTC可溶入培养基中一起高压灭菌．只需控制相应的压力和时间．故可省去对TTC溶液过滤除菌和临用时加入之烦
4 TTC嗜盐培养基在保存条件的观察：将已灭菌的培养基置室内避光或冰箱保存1个 月，无颜色变化，甚至置室内不避光保存也无颜色变化，因此该培养基在保存过程中不受光线对TTC分解的影响。