实验——化学因素对微生物的影响

2021/3/8 13:08:04  作者:中华试剂网


1 目的
1.1 了解化学因素对微生物生长的影响
1.2 掌握检测pH值、化学药剂对微生物生长影响的方法
2 原理 
抑制或杀死微生物的化学因素种类极多,用途广泛,性质各异。其中表面消毒剂和化学药剂最为常见。表面消毒剂在极低浓度时,常常表现为对微生物细胞的刺激作用,随着浓度的逐渐增加,就相继出现抑菌和杀菌作用,对一切活细胞都表现活性。化学药剂主要包括一些抗代谢物,例如抗生素等。在微生物实验中,pH值的变化也对微生物生长有很大影响。
3 材料
3.1 菌种
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母菌、青霉菌、灰色链霉菌。
3.2 培养基
肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、豆芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基。
3.3 药品
土霉素、新洁尔灭、复方新诺明、汞溴红(红药水)、结晶紫液(紫药水)。
3.4 其他物品
培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、振荡器、游标尺、分光光度计。
4 流程
4.1化学药剂对微生物生长的影响
无菌培养皿→配菌悬液→滴加菌样→倒平板→药剂处理→培养→观察结果
4.2不同pH对微生物生长的影响
配培养基→配菌悬液→接种→培养→观察结果 
5 步骤
5.1化学药剂对微生物生长的影响
5.1.1配制菌悬液
取培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1支,分别加入4m1无菌水,用接种环将菌苔轻轻刮下、振荡,制成均匀的菌悬液,菌悬液浓度大约为106cfu/mL。
5.1.2滴加菌样
首先取3个无菌培养皿,每种试验菌一皿,在皿底写明菌名及测试药品名称。然后分别用无菌滴管加菌4滴(或0.2m1)菌液于相应的无菌培养皿中。
5.1.3制含菌平板
将融化并冷却至45—50℃的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约12ml~15m1,迅速与菌液混匀,冷凝备用。
5.1.4化学药剂处理
用镊子取分别浸泡在土霉素、复方新诺明、新诺尔灭、红汞和结晶紫药品溶液中的圆滤纸片各一张,置于同一含菌平板上。
5.1.5培养
片刻后,将平板倒置于37℃温箱中,培养24h。
5.1.6观察结果
观察抑菌圈,并记录抑菌圈的直径。
5.2不同pH对微生物生长的影响
5.2.1配制培养基
肉膏蛋白胨液体培养基(标记A),配制豆芽汁葡萄糖液体培养基(标记B),分别调pH至3、5、7、9和ll,每pH值培养基3管,每管盛培养液5m1,灭菌备用。
5.2.2配置菌悬液
取培养18—20 h的大肠杆菌、酿酒酵母菌斜面各1支,加入无菌水4ml,制成菌悬液。
5.2.3接种与培养
A培养基中接种大肠杆菌液l滴(或0.1毫升)、摇匀,置37℃温箱中培养24h。B培养基接种1滴(或o.1m1),摇匀,置28℃温箱中培养24h。
5.2.4观察结果
根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。
6 思考
6.1上述多个试验中,为什么选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯革芽孢杆菌作为试验菌?
6.2说明青霉素和链霉素的作用原理。
6.3通过实验说明芽孢的存在对消毒灭菌有什么影响?
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