检测方法基本操作步骤:
1.提取:
称取2 g(精确到0.01 g)的均匀样品于50 mL离心管中,加入8 mL乙酸钠缓冲液,充分混匀,再加入50 μLβ-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,混匀后于37℃水域水解12 h。添加100 μL 10 ng/mL的内标液于待测样品中,加盖置于水平振荡器中振荡15 min,5000 r/min离心10 min。取4 mL上清液加入0.1 moL/L高氯酸溶液5 mL,混合均匀。用高氯酸调节pH到1±0.3。5000 r/min离心10 min后,将全部上清液(约10 mL)转移到50 mL离心管,用10 moL/L的氢氧化钠调节pH到11。加入10 mL饱和氯化钠溶液和10 mL异丙醇/乙酸乙酯(6:4)混合溶液,充分提取,在5000 r/min离心10 min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气吹干。加入5 mL乙酸钠,超声混均溶解备用。
2.净化:
将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置,将溶液上柱,依次用2 mL去离子水、2 mL 2%甲酸水溶液和2 mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干。最后用2 mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。流速控制在0.5 mL/min,洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入200 μL 0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95:5),超声混均,15000 r/min离心10 min。