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蛋白纯化必须知道的试剂——DTT

2024/12/13 15:05:22  作者:中华试剂网


DTT应用领域

 
体外诊断试剂辅料
 
对蛋白质的研究是理解生命现象的关键。
 
DTT二硫苏糖醇作为一种强还原剂,可以还原蛋白质中的二硫键,防止半胱氨酸残基形成分子内和分子间的二硫键,帮助我们保护蛋白质中的巯基。
 
产品简介
 
 
DTT全名是1,4-二硫代苏糖醇,分子式是C4H10O2S2,分子量是154.25。
 
它看起来是一种白色粉末,有点像糖粉,但其实味道不太好闻。DTT两个巯基基团赋予DTT强还原性,能够与其他分子发生氧化还原反应,将其还原为较低价态。DTT可溶于水与乙醇,在工作溶液里,DTT的两个巯基能将蛋白质中的二硫键(S-S)有效还原,使其转变为两个单独的硫氢键(-SH)。
 
DTT的还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。在pH值为7-9时最有效而在pH低于3时失效。因此在使用时通常置于弱碱性溶液中以保持其稳定性。
 

蛋白质研究中的应用
 
 
DTT在蛋白质研究中的应用主要集中在以下几个方面:
 
·蛋白质还原
 
DTT能够还原蛋白质中的二硫键,这对于研究蛋白质的结构和功能至关重要。通过破坏蛋白质分子中的二硫键,DTT有助于蛋白质的解折叠或去聚合,从而暴露蛋白质的内部结构,便于进一步的研究。
 
·防止蛋白质聚合
 
在某些条件下,蛋白质可能会发生聚合,影响纯化效果。DTT可以通过还原二硫键,降低蛋白质的聚合倾向,提高纯化效率和效果。
 
·蛋白质巯基保护
 
DTT常用作蛋白质巯基的保护剂,防止蛋白半胱氨酸残基形成分子内和分子间的二硫键,这对于维持蛋白质的活性和稳定性非常重要。
 
·核酸研究
 
DTT可破坏RNase蛋白质中的二硫键,使RNA酶变性,有助于如RNA建库、RNA扩增等实验的进行。

使用条件和注意事项
 
 
DTT在蛋白纯化中的使用条件和注意事项:
 
·浓度控制‌
 
DTT的浓度需要根据实验的具体需求和蛋白质的特性来确定。过高的DTT浓度可能会导致蛋白质的结构过度破坏,影响其生物活性;而过低的浓度则可能无法有效地还原二硫键,导致蛋白质无法充分释放和纯化。
 
·温度和时间控制‌
 
DTT的加入时间和温度等因素也需要严格控制,以确保实验结果的准确性和可靠性。
 
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