脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒
产品名称:脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒
产品英文名: Proline (PRO) Content Assay Kit
产品货号:BC0290 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;
库存状态:现货
关键字: : 脯氨酸检测试剂盒|PRO检测试剂盒|脯氨酸|试剂盒
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简要介绍:
Pro 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm 测定吸光度。
产品详细描述
产品内容:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:冰乙酸4℃保存。(自备)
试剂二:液体45 mL×1瓶, 4℃保存。
试剂三:甲苯4℃保存。(自备)
标准品:脯氨酸 10mg,4℃保存。
产品说明:
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。
实验需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备
1、细胞、细菌或组织样品的制备 :
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min;10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入0.9mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
3、标准品的处理:称取1mg,将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/mL。
1、分光光度计预热30min以上,调节波长520nm,甲苯调零。
2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。
3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转试剂三中;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值。
4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。
三、Pro含量计算:
1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y为脯氨酸含量,μg/mL;x为OD值)
2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算,先根据标准曲线求得y值:
细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷细胞浓度(104 cell/mL)
Pro含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)
3、血清(浆)中脯氨酸含量,先根据标准曲线求得y值:
Pro含量[μg/mL血清(浆)] = y÷0.1mL血清(浆)/mL
注意:提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
相关文献:
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