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单胺氧化酶(MAO)活性检测试剂盒说明书

2024/9/9 9:24:53  作者:索莱宝


 

 
BC0015 -- 1 页,共 3
单胺氧化酶(MAO)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0015
规格:100T/96S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称
规格
保存条件
提取液一
液体 110 mL×1
2-8℃保存
提取液二
液体 110 mL×1
2-8℃保存
试剂一
液体 45mL×3
2-8℃保存
试剂二
液体 3 mL×1
2-8℃保存
产品说明:
MAOEC1.4.3.4)包括 MAO-A MAO-B,是一种结合在线粒体外膜上的黄素蛋白,可催化神经递质和生
物胺氧化脱氨。单胺氧化酶与机体老化有关,被认为是衰老的标志,其主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是
分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理
功能。
MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸,底物在 360nm 处有特征吸收峰,通过测定 360nm
处光吸收下降的速率,可计算 MAO 活性。
Monoamine Substrate360nm Acids
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱中、可调式移液器、微量石英比色皿/96 UV 板、
震荡仪、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1 临用前根据实验用量取出部分提取液一、提取液二和试剂一置于 4℃预冷 30min
2 组织样本:按照样本质量(g):提取液一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆;1000g 4℃离心 10min,取上清,将上清液转移至预冷的离心管,于 10000g
4℃离心 30min。弃上清,沉淀中加入 1mL 预冷的提取液二,振荡混匀,于 16000g4℃离心 40min,弃上清,加
1mL 试剂一,振荡混匀,置冰上待测。
3 细菌或细胞样本:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(10
4
个):提取液
一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一)加入提取液一,超声波破碎
细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min),1000g4℃离心 10min,取上清,将上清液
转移至预冷的离心管,于 10000g4℃离心 30min。弃上清,沉淀中加入 1mL 预冷的提取液二,振荡混匀,于 16000g
4℃离心 40min,弃上清,沉淀中加入 1mL 试剂一,振荡混匀,置冰上待测。
MAO
 
 
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4 血清(浆)或液体样本:直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 360nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、加样表(在微量石英比色皿/96 UV 板中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL
测定管
空白管
样本(μL
20
-
试剂一(μL
160
180
试剂二(μL
20
20
将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 UV 板中,迅速吹打混匀,分别测定 360nm 10s
吸光值,记为 A 测定管 1A 空白管 1;然后置于 37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应 2h,测定 360nm
吸光值,记为 A 测定管 2A 空白管 2,计算 ΔA 测定=A 测定管 1-A 测定管 2ΔA 空白= A 空白管 1-A
空白管 2ΔA=ΔA 测定-ΔA 空白。空白管只需测 1-2
三、MAO 活力的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U/mg prot= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 mg 组织每分钟消耗 1nmol 底物定义的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性(U /g 质量)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ÷V 样总×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U /10
4
cell= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ÷V 样总×细胞数量)÷T=57.08×Δ细胞数量
4 按照样本体积计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 mL 血清或液体样本每分钟消耗 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性(U /mLɛ÷d ×V 反总×10
9
÷V ÷T= 57.08×ΔA
ε:底物摩尔消光系数:1460L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV 反总:反应总体积,0.0002LV 样:加入
样本体积,0.02mLV 样总:提取液体积,1mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,gT:反应时
间,120min10
9
:单位换算系数,1mol=10
9
nmol
b.用 96 UV 板测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性U /mg prot= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 g 组织每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性U /g 质量)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ÷V 样总×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义:37℃pH7.6 条件下,每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性U /10
4
cell= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V ÷V 样总×细胞数量)÷T= 95.13×Δ细胞数量

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