贴壁细胞：
1、被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。
2、5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞：
1、收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2、将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。