添加蛋白酶抑制剂是大多数细胞裂解和蛋白质提取的必要步骤。蛋白质提取过程中，内源性蛋白酶会降解蛋白质，导致蛋白质产量的降低。在裂解试剂中加入蛋白酶抑制剂，可防止提取蛋白的降解，确保在细胞裂解后获得蛋白质的产量。
蛋白酶抑制剂是生物或化学化合物，其作用是可逆或不可逆地结合蛋白酶。大多数已知的蛋白酶属于四个进化上不同的酶家族之一，基于功能基团参与肽键的裂解。一般情况下，蛋白提取过程中总是需要使用蛋白酶抑制剂。大多数情况下，需使用几种不同抑制剂化合物的混合物（也称Cocktail,鸡尾酒），以确保蛋白质提取物在分析之前不会降解。
常见蛋白酶抑制剂
常见蛋白酶抑制剂活性组分
| 抑制剂 |
分子量 |
靶点 |
机制 |
溶解度（溶剂） |
工作浓度 |
| 氟化钠 |
42 |
丝氨酸/苏氨酸和酸性磷酸酶 |
不可逆 |
40mg/mL (H2O) |
1 to 20mM |
| 原钒酸钠 |
183.9 |
酪氨酸和碱性磷酸酶 |
不可逆 |
20mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| β-甘油磷酸钠(二钠盐) |
216 |
丝氨酸-苏氨酸磷酸酶 |
可逆 |
10mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| 焦磷酸纳 |
221.9 |
丝氨酸-苏氨酸磷酸酶 |
不可逆 |
65mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| AEBSF•HCl |
239.5 |
丝氨酸蛋白酶 |
不可逆 |
200mg/mL (H2O) |
0.2 to 1.0mM |
| 抑肽酶 |
6511.5 |
丝氨酸蛋白酶 |
可逆 |
10mg/mL (H2O) |
100 to 200nM |
| Bestatin |
308.4 |
氨肽酶 |
可逆 |
5mg/mL (MeOH) |
1 to 10µM |
| E-64 |
357.4 |
半胱氨酸蛋白酶 |
不可逆 |
20mg/mL(1:1 EtOH:H2O) |
1 to 20µM |
| EDTA |
372.2 |
金属蛋白酶(螯合阳离子) |
可逆 |
10g/100mL (H2O) |
2 to 10mM |
| 亮抑酶肽 |
475.6 |
丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
可逆 |
1mg/mL (H2O) |
10 to 100µM |
| Pepstatin A |
685.9 |
天冬氨酸蛋白酶 |
可逆 |
1mg/mL (MeOH) |
1 to 20µM |
| PMSF |
174.2 |
丝氨酸蛋白酶 |
可逆 |
18mg/mL (MeOH) |
0.1 to 1.0mM |
常用蛋白酶抑制剂混合物组成
| 抑制剂 |
工作浓度 |
靶点 |
| AEBSF |
1mM |
丝氨酸蛋白酶 |
| 抑肽酶 |
800nM |
丝氨酸蛋白酶 |
| Bestatin |
50μM |
氨肽酶 |
| E-64 |
15μM |
半胱氨酸蛋白酶 |
| 亮抑酶肽 |
20μM |
丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
| Pepstatin A |
10μM |
天冬氨酸蛋白酶 |
| EDTA* |
5mM |
金属蛋白酶(螯合阳离子) |
*EDTA影响蛋白活性时，需实验是否需要添加EDTA
产品列表
| 产品号 |
产品名称 |
规格 |
Cas |
包装 |
| S118142 |
氟化钠 |
昆虫细胞培养级, ≥99% |
7681-49-4 |
100g,500g |
| D106347 |
β-甘油磷酸钠五水合物 |
>95.0%(T) |
13408-09-8 |
25g,100g,500g |
| S108847 |
焦磷酸钠 |
AR,99.0% |
7722-88-5 |
500g,20*500g,2.5Kg |
| A301905 |
AEBSF溶液 |
50mg/ml in H2O |
30827-99-7 |
0.5mL,1mL |
| A301913 |
AEBSF溶液 |
10mg/ml in H2O |
30827-99-7 |
0.5mL,1mL |
| A301991 |
抑肽酶溶液 |
1mg/ml in water |
9087-70-1 |
1mL |
| B113164 |
乌苯美司(Bestatin) |
超纯级，>99% |
58970-76-6 |
10mg,100mg,50mg,500mg,1g |
| E109034 |
E-64 |
蛋白酶抑制剂,99% |
66701-25-5 |
5mg,25mg,100mg |
| E112489 |
乙二胺四乙酸(EDTA) |
99%,用于细胞培养 |
60-00-4 |
100g,500g |
| L111765 |
亮抑酶酞 |
≥90%(HPLC) |
103476-89-7 |
1mg,5mg,25mg,100mg |
| P113168 |
胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin A) |
≥75% (HPLC) |
26305-03-3 |
5mg,10mg,25mg |
| P105539 |
苯甲基磺酰氟(PMSF) |
≥98.0% (GC) |
329-98-6 |
5g,25g,100g |
| P301906 |
PMSF溶液 |
100mM in ethanol |
329-98-6 |
1mL |
| P301902 |
蛋白酶抑制剂混合物 |
100×,不含EDTA |
- |
1mL |
| P301903 |
蛋白酶抑制剂混合物 |
100×,无动物源性 |
- |
1mL |