牛血清白蛋白的制备方法
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白(ml)0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl(ml)1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂(ml)5 5 5 5 5 5 5
摇匀,1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色
3、以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐标轴上绘制标准曲线。
(1)利用标准曲线查出回归方程。
(2)用公式计算回归方程。
(3)或用origin作图 ,测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相关系数应过0.999以上,至少2个9以上。
(4)绘图时近两使点在一条直线上,在直线上的点应该在直线两侧。
含量的测定
样品即所测蛋白质含量样品(含量应处理在所测范围内),依照操作步骤1操作,测出样品的A595nm,然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间,所以上述样品如果A595nm值太大,可以稀释后再测A595nm值,然后再计算。
牛血清白蛋白的注意事项
1. 玻璃仪器要洗涤干净。
2. 取量要准确。
3. 玻璃仪器要干燥,避免温度变化。
4. 对照:用被测物质以外的物质作空白对照。