酵母总RNA提取方法

2021/4/7 12:21:37  作者:中华试剂网


热酚法抽提酵母RNA

(1)  将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中,30过夜旋转培养。

(2)  稀释过夜培养的菌液,重新在10ml培养基中培养细胞。

(3)  OD600达到1.0时,收菌,4000rpm/min离心5min,弃培养基。

(4)  将细胞悬浮于400μl AE缓冲液(50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2)。

(5)  加入1/10体积的10% SDS,充分混合。 

(6)  加入等体积在65预热的酸性酚(pH4.5),混合。

(7)  65加热5min,冰上放置10min

(8)  在室温下8000rpm/min离心10min

(9)  取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25241),10000rpm/min离心8min

(10)  取水相,加入等体积氯仿/异戊醇(49110000rpm/min离心8min

(11)  加入1/10体积3M pH5.2的醋酸钠,2.5倍体积的纯乙醇,-20过夜沉淀。

(12)  沉淀样品于4离心5min,去除液体。

(13)  在冰上干燥RNA(放置15min),最后用适量DEPC水溶解RNA

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