免疫组织化学是将组织形态学与免疫学结合的关键技术，通过抗原–抗体特异性识别在组织切片上可视化目标分子表达，广泛用于基础研究、药物研发、病理学验证与数字病理分析。IHC对样本前处理、抗原修复、阻断、抗体孵育、显色与封片等各环节的化学环境高度敏感；任何配方不当、杂质量不稳或批次波动，都会导致背景升高、信号偏移或定位失真，从而影响可重复性与跨平台可比性。
一、定义与意义
“适用于免疫组织化学（for IHC）试剂”是指围绕IHC全流程用途化验证的化学与生物学配方体系，覆盖固定后切片的抗原修复、封闭、抗体稀释与孵育、洗涤、显色/荧光检测与封片等关键步骤。与通用试剂相比，此类产品强调：
- 低背景与高信噪比：洗涤剂低过氧化物、显色体系低本底、封片剂低自发荧光。
- 抗原保真与可重复：修复液pH/缓冲容量精确、载玻片附着力高，跨批一致。
- 体系兼容：HRP/AP路线明确禁忌（HRP禁NaN₃；AP全流程避磷酸盐——孵育/洗涤/显色）。
- 文件完备：COA含pH/纯度/背景与兼容性声明，配趋势数据与留样策略。
二、关键质量要求与检测方法
|
控制维度
|
质量要求
|
检测方法
|
技术意义
|
|
抗原表位保持
|
兼容热修复/酶修复，抗原构象稳定
|
标准阳性组织切片对比、抗原回收曲线
|
提升阳性信号稳定性
|
|
低背景与非特异
|
降低内源性酶、Fc、带电/疏水吸附
|
空白一抗/等浓度同型对照、背景光密度扫描
|
提高信噪比与判读准确
|
|
酶/显色体系兼容
|
HRP/DAB、AP/红色底物曲线平滑
|
时间分辨显色曲线、抑制率测试
|
保持色阶线性与可重复
|
|
荧光兼容性
|
低自发荧光、抗淬灭
|
自发荧光基线、光褪色耐受测试
|
适配多重荧光IHC
|
|
pH/缓冲与盐度稳定
|
稀释液、洗液、封闭液化学稳定
|
pH、电导与渗透压测定
|
防止边缘效应与伪影
|
|
批次一致性
|
功能性放行与趋势监控
|
阴/弱阳/强阳三水平对照、批间叠合
|
保障跨批可比与回顾一致性
|
三、应用范围
- 常规定位与方法学验证：组织/细胞内膜、胞浆、核标志物定位；小试优化修复条件（pH6/9、时间/温度）与显色以获得最高S/N。
- 肿瘤相关研究：分型与来源判断（CK7/CK20、EMA、Syn/CgA），增殖/通路标志（Ki-67、p53、HER2、PD-L1）半定量评估（科研用）。
- 免疫微环境评估：免疫细胞浸润与分布（CD3/CD4/CD8、CD20、CD68、FOXP3），可配合数字病理进行定量分析。
- 器官与神经系统标志：神经/胶质（NeuN、GFAP、Iba1）及肝肾心肺功能蛋白（Albumin、Na⁺/K⁺-ATPase、AQP）定位与变化观察。
四、主要组成与功能定位
|
试剂类别
|
主要功能与描述
|
常见示例
|
|
一抗
|
与目标抗原特异性结合的核心试剂。
|
单克隆抗体：高特异性，识别单一表位。
多克隆抗体：高亲和力，识别多个表位。
|
|
二抗
|
与一抗特异性结合，并携带检测标记物，用于信号放大和检测。
|
酶标二抗：如HRP或AP标记的二抗。
荧光标记二抗：如Cy3，FITC标记的二抗。
|
|
检测系统
|
进一步放大信号，提高检测灵敏度，尤其适用于低丰度抗原。
|
亲和素-生物素复合物法试剂。
聚合物法检测系统。
|
|
抗原修复试剂
|
逆转福尔马林固定导致的抗原交联，暴露抗原表位。
|
枸橼酸缓冲（pH6.0）。
EDTA缓冲（pH8.0-9.0）。
|
|
酶底物
|
与标记的酶（HRP/AP）反应，产生不溶性有色沉淀物以定位抗原。
|
HRP底物：如DAB（棕黄色），AEC（红色）。
AP底物：如BCIP/NBT（蓝紫色），Fast Red（红色）。
|
|
缓冲液与封闭液
|
用于洗涤、稀释和封闭，以减少非特异性背景染色。
|
洗涤缓冲液：如PBS，TBS。
封闭液：如正常血清，BSA/酪蛋白、内源性过氧化物酶阻断（H2O2）
|
|
复染剂与封片剂
|
对细胞核或细胞质进行对比染色，并用介质封存组织切片。
|
核复染剂：如苏木精。
封片剂：用于荧光或永久封片。
|
五、常见实验问题与解决方案
|
问题
|
典型表现
|
可能成因
|
解决与预防
|
|
背景高
|
弥漫浅染、非靶区显色
|
阻断不足、洗涤不彻底、稀释体系不匹配
|
加强阻断与洗涤；更换低背景稀释/洗涤体系；优化组织附着与清洁
|
|
信号弱/丢失
|
弱阳不可辨、定位模糊
|
修复不足或抗体失活、切片老化
|
延长或调整修复条件；核对抗体储存与在用期；优选适配修复缓冲
|
|
过度修复
|
背景上升、结构破坏
|
热修复强度过高、酶修复时间过长
|
降低温度或时间；更换化学体系较温和的修复液
|
|
非特异条带/颗粒
|
颗粒状沉积、边缘假阳
|
洗涤离子强度不当、载玻片污染
|
调整离子强度与表面活性剂水平；更换清洁度更高的耗材
|
六、常见问答
Q1：修复用pH6还是pH9？
A：取决于抗体与表位。一般pH6（枸橼酸）偏经典表位，pH9（EDTA）对膜蛋白/强交联更有效。
Q2：HRP路线为什么不能用NaN₃？
A：叠氮钠不可逆抑制HRP，直接导致信号下降或假阴性。如需防腐，选非叠氮体系并经功能法验证。
Q3：AP显色阶段为什么要避磷酸盐？
A：磷酸盐抑制AP活性；全流程使用TBS（孵育/洗涤/显色），并在COA或抽检中确认PO₄³⁻低至阈值内。
七、阿拉丁产品优势
- 品类齐全：一抗/二抗、聚合型HRP/AP检出、DAB与荧光底物、修复液/封闭液/洗液与对照，IHC全流程一站式覆盖。
- 低背景、高信噪：面向FFPE优化配方与参数建议，真实组织验证，显著降低非特异染色。
- 批次稳定、可追溯：严格放行与留样比对；随货/在线提供COA，批号全程追踪。
- 技术支持到位：一对一条件优化与多重IHC/IF设计建议，提供自动化参数迁移指导。
八、与相邻级别的区别
|
级别
|
核心应用场景
|
检测目标
|
典型样本类型
|
核心优势
|
|
for IHC（免疫组织化学）
|
组织水平的蛋白定位与表达分析
|
特定蛋白在组织细胞中的空间分布
|
甲醛固定石蜡包埋组织、冰冻组织
|
保留组织形态，直观观察蛋白在组织中的定位
|
|
for WB（免疫印迹）
|
蛋白定量与分子量鉴定
|
特定蛋白的表达量及分子量确认
|
细胞裂解液、组织匀浆
|
可验证蛋白分子量，适合半定量分析
|
|
for IF（免疫荧光）
|
细胞 / 组织内蛋白精准定位
|
特定蛋白在细胞内的亚细胞定位
|
细胞爬片、冰冻组织、石蜡组织
|
高分辨率，可同时标记多种蛋白（多色荧光）
|
|
for ELISA（酶联免疫吸附）
|
体液中蛋白的定量检测
|
特定蛋白的绝对含量（如细胞因子）
|
血清、血浆、细胞培养液
|
高灵敏度、高通量，适合大量样本定量
|
|
for IP（免疫沉淀）
|
蛋白互作研究与蛋白纯化
|
特定蛋白及其结合的相互作用蛋白
|
细胞裂解液
|
可捕获目标蛋白及其复合物，研究蛋白互作
|
综上，For IHC级试剂以低背景、高信噪和跨批一致性为核心，围绕抗原修复、阻断、孵育、显色/荧光与封片等关键环节进行用途化验证，确保组织定位可信、结果可重复、平台可比。阿拉丁在IHC全流程提供成体系产品与方法学支持，通过严格质控与可追溯文档，兼顾手工与自动化场景，帮助用户更快获得稳定、可解释的染色结果。
购买链接：：阿拉丁试剂网
