一、定义与特点
“适用于流式细胞术”的试剂是指围绕流式染色与检测流程开发并验证的配方体系，覆盖染色/洗涤缓冲、Fc阻断与背景抑制、存活染料、荧光抗体/化学探针、固定/透化试剂、单色补偿与性能质控微球等。核心特点是：
· 荧光信号稳定：低自发荧光、低光漂白、标记度（D/P）合理，强度线性可重复。
· 低非特异与高相容：Fc受体阻断、温和表活与蛋白稳定组分降低背景；与常见激光线/滤光片组兼容。
· 生物学安全与活性维持：低内毒素、无菌，维持细胞活率和形态；固定/通透流程兼容。
二、关键质量属性（CQAs）
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质量属性
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技术意义
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检测/验证方法
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荧光纯度与光谱匹配
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确保通道分离清晰、补偿可解耦
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光谱扫描；通道MFI与溢出矩阵评估
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标记度（D/P）与活性
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平衡信号强度与抗原亲和力
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UV-Vis计算D/P；抗原结合曲线对比
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信噪比（S/N）
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反映灵敏度与背景水平
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阳/阴群MFI比；同型/去抗原对照
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批次一致性
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门控与定量的跨批可重复性
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新旧批并行；ΔMFI、CV与补偿矩阵差异
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非特异结合
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减少伪阳与阈值漂移
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Fc Block前后比较；同型对照背景率
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光稳定性
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上机期间信号保持
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持续曝光衰减测试；时间序列MFI
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细胞相容性/活率
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避免染色过程损伤细胞
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PI/7-AAD/固定可染活力染剂检测
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缓冲体系稳定性
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pH/离子/蛋白浓度恒定，降低吸附
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pH、电导、蛋白定量；长期在用观察
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无菌与内毒素
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防止细胞刺激与假阳性
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平板培养；LAL法（必要时）
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固定/通透兼容性
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保持表位可识别与荧光稳定
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不同固定/通透条件下的信号恢复度
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三、适用范围
1.免疫细胞分型与表型分析
鉴定淋巴细胞、单核细胞、树突细胞等亚群的表面标志物（CD分子）表达。
2.功能检测
细胞增殖（CFSE、Ki-67）、活性氧（DCFH-DA）、细胞凋亡（Annexin V/PI）、细胞周期等。
3.信号通路与胞内抗原检测
通透后检测磷酸化蛋白、转录因子（pSTAT、NF-κB）等。
4.药物筛选与免疫反应监测
用于药物效应评估、免疫治疗监控（CAR-T、免疫检查点）、疫苗免疫应答分析。
5.质量控制与生产监测
细胞制备、培养及流式质控样的纯度与活率检测。
四、主要组成与功能定位
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类别
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常用试剂/配方
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功能说明
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缓冲体系
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PBS、HBSS、FACS buffer（PBS+1–2%BSA；0.05–0.1%NaN₃仅用于固定/分析样本，活细胞/分选禁用）
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保持渗透压、减少非特异结合（活细胞用无叠氮配方）
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核染剂
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DAPI、PI、7-AAD、Hoechst
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细胞活性与细胞周期分析
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固定/通透剂
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多聚甲醛、皂苷、Triton X-100
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固定形态或通透膜以染色胞内抗原
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洗涤与稀释液
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FACS buffer/PBS
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去除游离抗体与背景荧光
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五、常见问题与解决方案
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问题
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可能原因
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解决策略
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信号弱
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染料光漂、标记密度低、抗原表达弱
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使用高亮度染料、增加孵育浓度或延长时间
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背景高
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非特异吸附、死细胞过多
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增加Fc Block、去死细胞、优化洗涤步骤
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光谱溢出
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染料通道重叠、补偿矩阵不准
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重设补偿珠，选择光谱分离度更好的组合
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荧光漂白
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强光暴露或未加抗光漂剂
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避光操作、缩短上机时间、添加防漂剂
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细胞聚团
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缓冲液中Ca²⁺/Mg²⁺过高或温度不稳
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使用无钙/镁PBS、控制温度4–8°C
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批次差异
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抗体或染料批变更
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新旧批平行验证，更新补偿与门控参数
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六、常见问答
Q1：染色后信号太弱，阳性群难区分？
A：检查抗体稀释比例与孵育时间是否过短；确认样品中靶抗原表达量是否低；可尝试延长孵育（30→45 min），在4°C避光下操作，并确保洗涤缓冲中含1%BSA以防抗体吸附损失。
Q2：固定后荧光明显下降？
A：部分染料对醛固定敏感（尤以串联染料如PE-Cy5/PE-Cy7）；FITC/APC多数可耐受温和固定。优先选固定兼容或可固定活性染料
Q3：死细胞比例高、群体聚集？
A：染色前保证细胞健康度（>90%）；使用不含钙镁的PBS降低黏附；加入DNAse I（50 µg/mL）可减少聚团；上机前过滤样品，确保颗粒分散。
七、使用规范与储存建议
· 储存条件：2–8°C避光密封；冻融会导致染料失活或蛋白聚集。
· 操作前准备：抗体轻轻混匀后使用，不可剧烈振荡；样品与缓冲液温度一致。
· 避光与时效：荧光抗体配制后应立即上机检测；延时不超过2小时。
· 洗涤与稀释：推荐FACS buffer（PBS+1%BSA；0.05–0.1%NaN₃仅限固定/分析样本，活细胞/分选禁用），维持低背景。
· 仪器标准化：每日以校准微球检查激光强度、光谱响应和补偿系数。
八、阿拉丁产品优势
1.高纯度荧光标记与严格光谱验证
荧光抗体均经单峰发射验证，并提供激发/发射参数，确保通道补偿精确。
2.低背景配方优化
内含温和表活与Fc阻断组分，显著降低单核细胞、巨噬细胞类的非特异结合信号，适配复杂样品。
3.批次稳定与跨平台兼容
每批均进行ΔMFI、补偿矩阵与多平台比对（BD、Beckman、Sony），支持长周期面板使用。
4.高生物安全与无菌控制
采用0.22 µm过滤与低内毒工艺，兼容原代细胞、免疫细胞制备及临床前体系。
5.光稳定增强与长期保存
含抗光漂剂与蛋白保护体系，可在多次采样过程中维持信号强度稳定，降低长期上机漂移。
6.完整的验证与文件支持
每个产品提供COA、光谱图、批间比对数据与推荐补偿矩阵，符合科研及药物研发文档化要求。
九、同类相似级别对比
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维度
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流式细胞术级（Flow Cytometry）
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免疫组织化学级（IHC）
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免疫分析级（ELISA/CLIA）
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检测对象与读出
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悬浮细胞单体，多参数荧光强度（MFI）、群体比例
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组织切片定位，显色/荧光图像、评分
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溶液相/固相信号，吸光度/发光读数
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关键配方关注
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荧光纯度、补偿相容、低非特异、活率维持
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抗原修复、封闭与显色动力学、低背景
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低本底、高S/N、线性与平台期稳定
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试剂核心
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荧光抗体、FACS缓冲、Fc Block、控制珠
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修复液、封闭剂、聚合物二抗、底物
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标记抗体/抗原、底物体系（TMB/ECL）
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典型质控
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补偿微球、强度标准珠、同型对照
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阳/阴对照片、显色曲线、形态评估
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阴/阳/空白对照、标准曲线（R²）
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常见风险
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光谱溢出、光漂、非特异、批次漂移
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过修复/欠修复、脱片、边缘加深
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自发色/自发光、基质效应、批次漂移
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方法转移难点
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面板设计与补偿矩阵复用
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修复窗口与显色时间重现
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标准线性与钳位误差控制
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结果形态
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单细胞分布与门控图
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图像定位与强度评分
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曲线/终点读数（OD、RLU）
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适用于流式细胞术（Flow Cytometry）的试剂，不仅要求化学纯度高，更强调光谱精确、信号稳定与实验可重复性。阿拉丁通过严格的荧光标记控制、跨平台性能验证及低背景配方优化，使每一次细胞分析都具备高分辨率与数据一致性。