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4、 血清(浆)或液体样本:直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 360nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、加样表(在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列试剂):
将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中,迅速吹打混匀,分别测定 360nm 处 第 10s 的
吸光值,记为 A 测定管 1、A 空白管 1;然后置于 37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应 2h,测定 360nm 处
吸光值,记为 A 测定管 2、A 空白管 2,计算 ΔA 测定=A 测定管 1-A 测定管 2,ΔA 空白= A 空白管 1-A
空白管 2。ΔA=ΔA 测定-ΔA 空白。空白管只需测 1-2 次。
三、MAO 活力的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U/mg prot)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 mg 组织每分钟消耗 1nmol 底物定义的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性(U /g 质量)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U /10
4
cell)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=57.08×ΔA÷细胞数量
4、 按照样本体积计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 mL 血清或液体样本每分钟消耗 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性(U /mL)=ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷V 样÷T= 57.08×ΔA
ε:底物摩尔消光系数:1460L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.0002L;V 样:加入
样本体积,0.02mL,V 样总:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时
间,120min;10
9
:单位换算系数,1mol=10
9
nmol。
b.用 96 孔 UV 板测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U /mg prot)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 g 组织每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U /g 质量)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义:37℃,pH7.6 条件下,每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性(U /10
4
cell)= ΔA÷ɛ÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 95.13×ΔA÷细胞数量